Статьи автора

БИОСИНТЕЗ СУБЕРИНОВОЙ КИСЛОТЫ ИЗ ГЛЮКОЗЫ ПО ОБРАЩЕННОМУ β-ОКИСЛЕНИЮ ЖИРНЫХ КИСЛОТ РЕКОМБИНАНТНЫМИ ШТАММАМИ Escherichia coli

Номер выпуска 2 от 12.11.2024

С использованием направленно сконструированных производных ранее полученных адипат-продуцирующих штаммов Escherichia coli MG1655 lacIQ, ∆ackA-pta, ∆poxB, ∆ldhA, ∆adhE, PL-SDϕ10-atoB, Ptrc-ideal-4-SDϕ10-fadB, ∆fadE, PL-SDϕ10-tesB, ∆yciA, Ptrc-ideal-4-SDϕ10-fabI, PL-SDϕ10-paaJ, ∆aceBAKϕ, ∆glcB и MG1655 lacIQ, ∆ackA-pta, ∆poxB, ∆ldhA, ∆adhE, PL-SDϕ 10-atoB Ptrc-ideal-4-SD ϕ10-fadB, PL-SDϕ10-tesB, ∆yciA, Ptrc-ideal-4-SDϕ10-fadE, PL-SDϕ10-paaJ, ∆aceBAK, ∆glcB продемонстрирована принципиальная возможность биосинтеза этой бактерией субериновой кислоты из глюкозы в результате обращения природного пути β-окисления жирных кислот. Конденсация ацетил-КоА с сукцинил-КоА и адипил-КоА обеспечивалась в рекомбинантах 3-оксоадипил-КоА тиолазой PaaJ, тогда как предполагаемая ацетил-КоА С-ацетилтрансфераза YqeF была неспособна к катализу соответствующих реакций. Биосинтез субериновой кислоты на уровне ~60 мкМ был достигнут при значительном усилении в штаммах экспрессии гена бифункциональной (S)-3-гидроксиацил-КоА-дегидрогеназы/еноил-КоА-редуктазы, fadB. Последующая инактивация в штаммах сукцинатдегидрогеназы повышала внутриклеточную доступность сукцинил-КоА для инициации первого раунда обращения цикла и способствовала росту накопления рекомбинантами целевого соединения до ~75 мкМ. Полученные результаты создают основу для разработки высокоэффективных штаммов-продуцентов для биотехнологического производства субериновой кислоты из возобновляемого сырья.

19 0

ОПТИМИЗАЦИЯ БИОСИНТЕЗА 1,3-БУТАНДИОЛА ИЗ ГЛЮКОЗЫ ПО ОБРАЩЕННОМУ ПУТИ β-ОКИСЛЕНИЯ ЖИРНЫХ КИСЛОТ РЕКОМБИНАТНЫМИ ШТАММАМИ Escherichia coli

Номер выпуска 3 от 10.01.2025

В производных штамма Escherichia coli MG1655 ΔackA-pta, ΔpoxB, ΔldhA, ΔadhE, лишенного путей смешанно-кислотного брожения, усилена экспрессия нативных генов L-1,2-пропандиол-оксидоредуктазы и НАДФН-зависимой альдегид-редуктазы, fucO и yqhD, и экспрессирован ген бутиральдегид-дегидрогеназы Clostridium saccharoperbutylacetonicum, bld. Способность к биосинтезу 1,3-бутандиола из глюкозы, в результате функционального обращения β-окисления жирных кислот, придана рекомбинантам за счет повышенной экспрессии генов atoB и fadB, кодирующих ацетил-КоА С-ацетилтрансферазу и бифункциональную (S)-3-гидроксиацил-КоА-дегидрогеназу/еномл-КоА-гидратазу. Достигнута анаэробная конверсия субстрата в целевой продукт на уровне 0.2 моль/моль при накоплении ~4 мМ 1,3-бутандиола. При повышении внутриклеточной доступности НАДН эквивалентов, за счет конститутивной экспрессии генов пируватдегидрогеназного комплекса, aceEF-lpdA, конверсия глюкозы в 1,3-бутандиол возрастала до ~0.3 моль/моль при накоплении целевого продукта на уровне ~7 мМ. Усиление экспрессии генов мембранно-связанной транстидрогеназы, pntAB, обеспечило синтез 9.5 мМ 1,3-бутандиола штаммом с повышенной экспрессией yqhD с коэффициентом конверсии 0.4 моль/моль.

28 0