By this author

Combined Systems of Recombinase Polymerase Amplification and Membrane Immunochromatography or Enzyme Linked Immunoassay for Quantitative Determination of Bacterial DNA

Issue number 2 from 13.11.2024

Разработаны и исследованы комбинированные биоаналитические системы для детекции бактерий в молоке. Эти системы основаны на изотермической рекомбиназной полимеразной амплификации (RPA) фрагмента гена и детекции полученных ампликонов ДНК, содержащих остатки биотина и флуоресцеина на противоположных концах, экспрессной мембранной хроматографией на тест-полосках или иммуноферментным анализом (ИФА) в микропланшетах. Показано, что разработанные тест-системы специфичны, чувствительны и просты в применении. Для постановки RPA требуется 20 мин при температуре 40°С. Иммунохроматографическое выявление ампликонов обеспечивает экспресс-тестирование в течение 10 мин и возможный визуальный учет результата. ИФА проходит в течение 75 мин, позволяет анализировать большое количество проб, а также количественно оценить результат. Установлено, что биоаналитические системы характеризуются широкой специфичностью в отношении различных серотипов бактерий подвида , относящихся к серогруппам B, C, D и E. Показано, что предел детекции геномной ДНК в тест-системах составляет 0.5 фг. Предел обнаружения сальмонелл в искусственно загрязненных пробах молока составил 8 × 10 КОЕ/мл. После предварительного культивирования исследуемых проб в течение 6 ч этот показатель оказался равным 2 × 10 клеток на 25 г молока.

24 0